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    免疫酶組織化學技術
    點擊次數:1491 更新時間:2016-02-22

    免疫酶組織化學技術

    .酶標直接法和間接法

        Nakane(966)將辣根過氧化物酶(HRP) 標記在抗體免疫球蛋白分子上,創建了酶標記免疫組化的直接法、間接法和橋法。

    2.PAP法

        Stemberger(969)在酶橋法的基礎上,建立了非標記抗體法,先將HRP免疫兔、羊或鼠,制成抗HRP抗體,再與HRP結合,制備成PAP復合物,其敏感性要比酶標直接法、間接法高出許多倍,其背景染色也要優于直接法和間接法。在此基礎上又出現了許多PAP法變型方法,如雙PAP法、AAPAP法、APAAP法等。

    3.ABC法

        20世紀60年代初,人們發現(biotin)與親和素(卵白素,avidin)之間具有高度的親和性,是自然界中具有zui強親和力的物質之一。到了20世紀70年代,人們又發現可以和抗體交聯,且或親和素與過氧化物酶或熒光素結合后,并不影響它們的生物學活性。Guesdon等(979)提出了標記、親和素以及—親和素搭橋法。在此基礎上,許世明(98)建立于標記親和素、間接橋法和ABC法。此方法已沿用了幾十年,得到普遍認可,物美價廉,背景干凈,但是缺點是操作比較麻煩,靈敏度沒有目前一些新的檢測系統高。法(或稱LSAB法)在ABC法基礎上作了許多改進,將鏈霉親和素直接偶合在一起,減少了操作步驟,增加了靈敏度。現zui大的問題是內源性的干擾,造成非特異性背景染色,從而直接影響到對染色結果的判斷。尤其在人體肝、腎、腸等組織中存在豐富的內源性,加上目前常規應用的抗原修復方法可以激活內源性,非特異性背景染色在某些組織的免疫組化染色中已變得尤為突出。為了克服這一缺陷,人們想出了許多種克服的方法,例如在抗原修復后用親和素或用20%雞蛋清進行封閉,但是效果往往不夠理想。另一種克服方法是采用由Zymed公司推出的A(非檢測系統)。該系統用FITC代替與二抗結合,三抗是結合了HRP的抗FIT抗體,而不用鏈霉親和素—HRP復合物。由于在人體組織中到目前為止尚未發現有內源性的能與FITC結合的物質,從而避免了因非特異性結合而產生的非特異性假陽性背景染色。

        雖然A系統成功地克服于非特異背景染色,而且具有與—親和素檢測系統相同的敏感性,但是卻沒有使檢測步驟有任何簡化。在實際工作中,為了適應臨床病理越來越多的日常工作需求,人們渴求一種更加簡便易行的方法,先后有多家公司推出二步法敏感的免疫組化檢測系統試劑,例如EnVision試劑、PicTureTM—plus和SuperPictureTM—plus試劑、UIP試劑和PowerVisionTM試劑。

     

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