大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)

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大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒【Rat Lung PrimacellTM：Normal Artery Fibroblasts】
     大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)大鼠肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自正常大鼠肺組織，呈單層多角形鋪路石狀分布。該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡，合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)，維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。 雖然肺動(dòng)脈組織機(jī)械韌性很強(qiáng)，但利用本公司試劑盒中提供的肺動(dòng)脈組織分離體系來(lái)分離，EDTA/EGTA處理過(guò)的薄的肺動(dòng)脈組織片能使得肺動(dòng)脈組織中大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞的一些功能特性發(fā)生改變，從而將大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)。

本試劑盒適用于分離培養(yǎng)新生兒或成年人的大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞。本體系提供了佳的組織分離條件，分離單個(gè)細(xì)胞的效率是已出版文獻(xiàn)中所報(bào)道的5~6倍。此外，本體系還能保證所分離的細(xì)胞在培養(yǎng)基中具有很高的活性。 大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒適合于培養(yǎng)人的大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞組織細(xì)胞。本試劑盒包含： （）OptiTDSTM大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞組織解離液（3×ml） （2）大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞組織處理緩沖液（00ml） （3）大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞組織洗液（ml（500x）） （4）大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（ml 500x）及血清（5x0ml） （5）大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基（5 x00ml） （6）大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞組織預(yù)備液（ x00 ml） （7）大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
培養(yǎng)步驟：
大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

小鼠真皮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基00mL

熱帶假絲酵母 Candida tropicalis

毛柄金錢(qián)菌(金針菇) Flammulina velutipes

人髂動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基00mL

葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum

植物桿菌 Lactobacillus plantarum

Calu-6(人肺退行性細(xì)胞)5×06cells/瓶×2

酒假絲酵母 Candida kefyr

豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum

MG-63(人骨肉瘤細(xì)胞)5×06cells/瓶×2

大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)3-溴吡分子式：58英文名稱：3- bromide：626-55-分子量： C5H4BrN

4-氯-3-硝三氟甲氧分子式：英文名稱：4- -3- nitro group three：4324535分子量：

,5-二硝萘分子式：28.7英文名稱：,5- two nitro naphthalene：605-7-0分子量： C0H6N2O4

鄰硝對(duì)甲砜甲分子式：25.23英文名稱：Ortho para nitro group for toluene：67-49-4分子量： C8H9NO4S

,2,3-三氯英文名稱：,2,3- three分子式：8.45分子量： C6H3Cl3：87-6-6

喹啉酸分子式：67.2英文名稱：Acid：89-00-9分子量： C7H5NO4

對(duì)三聯(lián)分子式：230.3英文名稱：To three：92-94-4分子量： C8H4

7-硝喹啉分子式：74.6英文名稱：7- nitro group：63-5-4分子量： C9H6N2O2

3,5-二氯溴分子式：225.9英文名稱：Two - 3,5- chloride：9752-55-7分子量： C6H3BrCl2；BrC6H3Cl2

堿性藍(lán)G英文名稱：Alkaline blue G分子式：分子量：：

注意事項(xiàng)：
. 接收到大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說(shuō)明書(shū)，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。