小鼠正常肝細胞；NCTCclone1469

細胞處理：

1） 凍存細胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

小鼠正常肝細胞；NCTCclone1469

商品屬性

商品介紹

細胞別稱；NCTC clone 1469; NCTC1469

種屬來源；小鼠

年齡性別；新生

組織來源；肝

生長特性；貼壁生長

細胞形態(tài)；上皮細胞樣

細胞代數(shù)；10代以內(nèi)

背景介紹；NCTC 1469細胞是于1952年建系，源于正常C3H/An小鼠的肝臟組織；NCTC 1469細胞可表達H-2K抗原，鼠痘病毒陰性。

生物安全等級；1

細胞規(guī)格；1x106cells/T25或1mL凍存管

支原體檢測；無

保藏機構(gòu)；ATCC; CCL-9.1 ECACC; 88111403

培養(yǎng)基；DMEM-H+10%FBS

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟：

（1）當顯微鏡下細胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。

（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。

（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。

（5）細胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。

（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。

（9）細胞凍存

細胞接收后的處理：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Smad同源物7(Smad7)重組蛋白 Recombinant Mothers Against Decapentaplegic Homolog 7 (Smad7)

CCL8 Protein Human 重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標簽)

CHODL重組小鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白 Protein

NOV Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV 蛋白

CNPY2重組人 CNPY2 蛋白 Protein

HPGD重組小鼠 HPGD / 15-PGDH 蛋白 Protein

Bcl2樣蛋白11(BCL2L11)重組蛋白 Recombinant Bcl2 Like Protein 11 (BCL2L11)

TMED1重組人 TMED1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CCL8 Protein Human 重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標簽)

IL6ST Protein Rat 重組大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 蛋白

小鼠乙型肝e抗原(HBeAg)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human soluble cluster of differeiation 30 ligand (sCD30L) ELISA Kit 人可溶性白細胞分化抗原30配體(sCD30L)檢測試劑盒

Humanaconitase2,ACO-2ELISAKit 人烏頭酸酶2(ACO-2)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor5-(Mouse5-Nucleotidase)ELISAKit小鼠5核苷酸酶

飲料L-乳酸比色法定量檢測試劑盒20次

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小鼠正常肝細胞；NCTCclone1469溴甲酚紫   5g

BromocresolPurple,FreeAcid   25g

溴酚蘭   10g

BromophenolBlue   50g

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Porcine leukemia inhibitory factor receptor (LIFR) ELISA Kit 豬白血病抑制因子受體(LIFR)檢測試劑盒

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體液人類巨細胞病毒蛋白酶(HCMVPROTEASE)活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒20次

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