當(dāng)前位置：對于Elisa試劑盒的操作你做的正確嗎?看這里！
點擊次數(shù)：756 更新時間：2020-06-27
Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。Elisa試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。
Elisa試劑盒的操作方法：
雙抗體夾心法
.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為～0μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.ml。37℃ 孵育0.5～小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.ml，37℃ 0～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或較淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則40nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.倍，即為陽性。
間接法
.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至～0μg/ml，每孔加0.ml，4℃過夜；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育小時,洗滌；
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)二抗體(抗抗體)0.ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6.’用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
