當(dāng)前位置：TSZ Elisa試劑盒在一項新的研究中，來自美國、巴西、尼加拉瓜和德國的研究人員開發(fā)出一種新的技術(shù)而使得通過捕捉和測試蚊子來監(jiān)控寨卡病毒（Zika virus, ZIKV）傳播能夠變得更加快速和更加低廉。這種基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增反應(yīng)（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）的檢測方法能夠區(qū)分寨卡病毒亞洲毒株和非洲毒株，而且在理論上可能被用來在現(xiàn)場直接檢測蚊子中可能存在的寨卡病毒。
美國普渡大學(xué)的Richard Kuhn（未參與這項研究）說，“你能夠僅是捕捉蚊子，將它們磨碎，或者獲得被感染者的血液樣品和其他類型的樣品，隨后直接檢測寨卡病毒是否存在。你不必進(jìn)行RNA純化，你也不必執(zhí)行逆轉(zhuǎn)錄步驟，因而真正地簡化這個過程。”
隨著寨卡病毒感染在新的地方出現(xiàn)，TSZ Elisa試劑盒利用一種廉價的簡易的現(xiàn)場檢測方法可更加簡單地監(jiān)控蚊子、進(jìn)行診斷和鑒定寨卡病毒毒株。
正如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）那樣，LAMP利用序列匹配的引物擴(kuò)增靶DNA序列。但是不同的是，PCR需要讓反應(yīng)試劑混合液不斷循環(huán)地經(jīng)歷不同的溫度，而LAMP是在恒定的63° C下進(jìn)行的。這意味著無需購買價格在.5萬美元到2萬美元的PCR熱循環(huán)儀，而僅需構(gòu)建250美元的加熱塊（heat block）。
寨卡病毒是一種RNA病毒，擴(kuò)增它的核酸需要先通過逆轉(zhuǎn)錄步驟將其轉(zhuǎn)化為DNA。一種逆轉(zhuǎn)錄酶執(zhí)行這種轉(zhuǎn)化，并被用于RT-PCR和逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增反應(yīng)（RT-LAMP）之中。但是已存在一些證據(jù)證實用于LAMP測定中的嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus stearothermophilus）DNA聚合酶也能夠發(fā)揮著逆轉(zhuǎn)錄酶的作用。確實，Rovnak已發(fā)現(xiàn)這種酶的逆轉(zhuǎn)錄酶活性是“非常令人印象深刻的”，這意味著它能夠同時執(zhí)行DNA轉(zhuǎn)化步驟和擴(kuò)增步驟。
Rovnak說，省掉這個逆轉(zhuǎn)錄步驟和使用簡單的加熱塊，當(dāng)然會讓這種檢測比RT-PCR測定更加廉價和便于攜帶。但是，如何首先分離寨卡病毒RNA？Rovnak也有一種簡單的現(xiàn)場友好的解決方案。
這種方案就是僅需磨碎攜帶寨卡病毒的蚊子，將它們加入到含有LAMP反應(yīng)試劑的試管中，在63° C下孵育，Rovnak團(tuán)隊能夠強(qiáng)健地擴(kuò)增寨卡病毒RNA。在5只感染上寨卡病毒的蚊子中，他們能夠準(zhǔn)確地全部檢測到，而且在3只未感染上寨卡病毒的蚊子中，他們均未檢測到這種病毒的存在。
考慮到將這種測定方法用于病人診斷，Rovnak團(tuán)隊接著直接擴(kuò)增來自被感染者的血漿、血清的寨卡病毒亞洲毒株，不過這也會產(chǎn)生一些假陽性和假陰性。Rovnak說，這是由于“尚不確定的抑制物質(zhì)”。
TSZ Elisa試劑盒在這種LAMP方法能夠成為一種診斷工具之前，它需要更一步的開發(fā)，但是鼓舞人心的是，它是與RT-PCR那樣是穩(wěn)健的、準(zhǔn)確的和敏感的，但是試劑成本下降了“大約一半”。
