當(dāng)前位置：合成培養(yǎng)基是在平衡鹽溶液中加入標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而構(gòu)成的培養(yǎng)基，現(xiàn)已成為普遍應(yīng)用的標(biāo)準(zhǔn)化的商品。盡管目前合成培養(yǎng)基含量豐富，但尚不能*體外細(xì)胞生長(zhǎng)的需要，使用時(shí)仍需或多或少的添加一定比例的天然培養(yǎng)基，主要是牛血清。
.合成培養(yǎng)基主要成分人工合成培養(yǎng)基的主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)離子及其他一些輔助物質(zhì)。
()氨基酸：合成培養(yǎng)基內(nèi)的氨基酸以必需氨基酸為主。這些氨基酸不能由細(xì)胞自身合成，必須依靠培養(yǎng)液供給。不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)氨基酸的要求各異，幾乎所有的細(xì)胞均對(duì)有較高的要求，的缺乏可致細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。由于在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)單獨(dú)配制， 20℃冰凍保存，用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含有的培養(yǎng)液在4℃冰箱中貯存兩周以上，應(yīng)補(bǔ)充原來(lái)量的。此外，配制培養(yǎng)液時(shí)應(yīng)使用細(xì)胞能利用的L型異構(gòu)體氨基酸，盡量避免使用D型氨基酸。
(2)碳水化合物：碳水化合物是細(xì)胞生長(zhǎng)能量的來(lái)源，也參與蛋白質(zhì)和核酸的合成，主要包括葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸鈉等。
(3)維生素：維生素在細(xì)胞代謝中主要參與形成輔酶、輔基。維生素分為水溶性和脂溶性?xún)纱箢?lèi)，配制時(shí)應(yīng)注意。
(4)無(wú)機(jī)離子：細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中需要鈉、鉀、鈣等無(wú)機(jī)鹽，有的培養(yǎng)液中含一些微量元素如：Fe 2+、Zn 2+ 、Cu 2+一等。
(5)其他成分：有的較為復(fù)雜的培養(yǎng)液中還需添加核酸降解物、氧化還原劑、三磷腺苷(ATP)和等。
目前一些常用培養(yǎng)液已制成干粉的商品出售。其配方均已相對(duì)固定，成分趨于簡(jiǎn)單化，僅能維持細(xì)胞生長(zhǎng)的zui低要求。在一些特殊情況下，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要補(bǔ)充其他的成分。如芷雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM培養(yǎng)液，使用時(shí)還要補(bǔ)加丙酮酸鈉和2一巰基乙醇等。
2．常用的合成培養(yǎng)基
()MEM也稱(chēng)*Eagle培養(yǎng)基，成分簡(jiǎn)單。它僅含有2種必需氨基酸、、8種維生素及必要的無(wú)機(jī)鹽。實(shí)際應(yīng)用時(shí)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要添加某種特殊成分進(jìn)行某些特殊細(xì)胞的培養(yǎng)。
(2)I)MEM是在MEM基礎(chǔ)上增加了各種成分的用量，可分為高糖型和低糖型。高糖型含葡萄糖45500g／L，低糖型含量為000g／L。高糖型適用于生長(zhǎng)較快，附著性差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。
(3)RPMI 640是由Moor等人針對(duì)培養(yǎng)小鼠白血病細(xì)胞而設(shè)計(jì)。開(kāi)始的配方特別適用于懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)，主要針對(duì)淋巴細(xì)胞，后經(jīng)幾次改良從RPM 630、634，而至RPMI640。其組分較為簡(jiǎn)單，適合于許多種類(lèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)，如腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、原代培養(yǎng)或傳代培養(yǎng)的細(xì)胞。RPMI 640目前已經(jīng)成為應(yīng)用的培養(yǎng)基之一。
(4)HamF2培養(yǎng)液962年Fam研究了適合小鼠二倍體細(xì)胞克隆化的培養(yǎng)基，命名為F7，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改良成為F0培養(yǎng)基，使之不僅適應(yīng)小鼠細(xì)胞而且也適用于人類(lèi)二倍體細(xì)胞的培養(yǎng)。965年Fam在原有配方的基礎(chǔ)上加入了一些微量元素和無(wú)機(jī)離子，研制了F2培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基可在加入很少血清的情況下應(yīng)用．特別適合進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，也是無(wú)血清培養(yǎng)中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
上述為幾種zui為常用的培養(yǎng)基，現(xiàn)已成為細(xì)胞培養(yǎng)普遍應(yīng)用的商品化的培養(yǎng)基。目前培養(yǎng)基的種類(lèi)雖已達(dá)數(shù)十種，但多以上述幾種為基礎(chǔ)加以改良而制備。實(shí)驗(yàn)者可根據(jù)需要進(jìn)行成分的增減和選擇，若無(wú)特殊要求，上述培養(yǎng)基基本上可以滿(mǎn)足絕大部分細(xì)胞培養(yǎng)的需要。
3．合成培養(yǎng)基的配制 由于培養(yǎng)液的配制過(guò)程繁雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)丁，現(xiàn)在大部分合成培養(yǎng)基已制成標(biāo)準(zhǔn)化的商品出售，已很少有實(shí)驗(yàn)室自己配制培養(yǎng)基。商品化的液體培養(yǎng)基購(gòu)回后可直接或稀釋后使用。粉制的培養(yǎng)基也只需按照說(shuō)明書(shū)，簡(jiǎn)單配制后即可使用，方便快捷。粉制培養(yǎng)基的配制時(shí)需要注意以下幾點(diǎn)：
()所用器皿應(yīng)*清洗干凈，烤干后備用。
(2)配制培養(yǎng)液及所使用的相關(guān)液體均需新鮮制備的三蒸水，并保證水的純度和質(zhì)量。
(3)認(rèn)真閱讀說(shuō)明書(shū)，根據(jù)配制說(shuō)明的要求添加干粉中不包含的成分，如NaHCO3 、等，也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求來(lái)決定。
(4)配制時(shí)要保證干粉充分溶解，NaHCO3 、等要在培養(yǎng)基*溶解后才能添加。
(5)培養(yǎng)液中添加的血清質(zhì)量應(yīng)保持穩(wěn)定，一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)盡量采用同一批號(hào)血清。
(6)常用培養(yǎng)液的pH值范圍為7．2～7．4。需要注意的是配制過(guò)程中，添加血清、抗生素以及過(guò)濾除菌等均可引起pH值的改變，多采用HCl和NaOH進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。
(7)配制好的培養(yǎng)液應(yīng)馬上過(guò)濾除菌，并進(jìn)行無(wú)菌實(shí)驗(yàn)，4℃保存。每批次配制的液體數(shù)量以使用兩周左右為宜，以免時(shí)間過(guò)長(zhǎng)造成營(yíng)養(yǎng)成分損失。
(8)培養(yǎng)液中血清添加量可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)。若培養(yǎng)液主要為細(xì)胞生長(zhǎng)增殖之用，所含血清比例較大。一般配法：基本培養(yǎng)基80％～90％，小牛血清0％～20％，并加雙抗生素(00U／m．00μg／ml)，上述比例如有特定需要，可根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)要求進(jìn)行增減；若主要作用是維持細(xì)胞緩慢生長(zhǎng)而不死(如增殖病毒時(shí))，一般血清含量較少，通常基本培養(yǎng)基為97％～98％，小牛血清3％～2％。
4．無(wú)血清培養(yǎng)基因血清所含成分復(fù)雜，同時(shí)也含有一些不可控因素，細(xì)胞毒性物質(zhì)和抑制物，不僅影響細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞某些功能的表達(dá)，有的還會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生去分化作用，影響一些基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的結(jié)果。因此，一些技術(shù)要求和研究目的較高的細(xì)胞培養(yǎng)，如細(xì)胞生長(zhǎng)因子研究和制備、單克隆抗體制備、細(xì)胞分泌產(chǎn)物的研究和制備等，都須用無(wú)血清培養(yǎng)基．以減少或去除異種蛋白及干擾因素。
無(wú)血清培養(yǎng)基主要有基礎(chǔ)培養(yǎng)基和輔加成分組成：
()基礎(chǔ)培養(yǎng)基：一般用人工合成培養(yǎng)基，zui常用的是HamF2和DMEM培養(yǎng)基l：混合。然后補(bǔ)加5mmol／L Hepes，．2g／ml NaHCO3作為基礎(chǔ)溶液。
(2)輔加成分有：①促貼壁附著成分，如纖維粘連蛋白、層粘連蛋白膠原等。②促生長(zhǎng)增殖成分，如一些生長(zhǎng)因子和激素。③蛋白酶抑制物，如大豆抑制劑(soybean trypsin inhibitor)。
這些輔加成分根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)條件和實(shí)驗(yàn)要求添加。一般先配好儲(chǔ)存液，過(guò)濾除菌，低溫保存，要避免反復(fù)凍融。使用濃度和使用方法各不相同。如纖維粘連蛋白的配制濃度為25mg～50mg／L，用時(shí)先涂在培養(yǎng)瓶皿支持物上；層粘連蛋白～5mg／L，可直接加在培養(yǎng)液中。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子配制濃度2mg／L，使用濃度5μg／L，可直接加入培養(yǎng)液中；大豆抑制劑，使用濃度為O．％～O．5％，通常配制在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中。
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