在Elisa試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加物加在elisa板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。
 

　　在ELISA實驗中，ELISA試劑盒是十分重要的存在，為了減少誤差的產生，接下來先來了解一下ELISA試劑盒冷凍后質量會受哪些因素的影響。
 

　　為其保存后可以使用，ELISA試劑盒不能反復凍融，如果您在一周之內做實驗，可以2-8℃保存；如果您在一周至一個月之內做實驗，可以-20℃保存；如果您在一個月以上做實驗，可以-80℃保存。但是值得注意的是，凍融一次比2-8℃保存損失更大，主要是因為蛋白的降解，凍融一次蛋白都有降解。
 

　　在建立ELISA方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1～2小時，產物的天生可達較高。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫4℃等。室溫溫育時平置于操縱臺上即可。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均采用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應貼著水面，使溫度迅速平衡。操縱時的室溫應嚴格限制在劃定的范圍內，尺度室溫溫度是指20～25℃，但詳細操縱時可根據仿單的要求控制溫育。